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0102030405
Test de toxicité et test de tératogénicité embryologique de l'acide nervonique chez le rat
2026-01-05
Abstrait
ObjectifAfin d'évaluer la toxicité de l'acide nervonique après administration continue pendant 90 jours et sa tératogénicité embryonnaire chez le rat SD, des études ont été menées pour fournir des données de référence sur la sécurité de ce médicament en pratique clinique. Conformément à la norme GB15193.13-2003, les effets toxiques et indésirables de l'acide nervonique ont été observés après 90 jours d'administration à des doses de 0,1, 0,3 et 0,6 g/kg. Conformément à la norme GB15193.14-2003, l'acide nervonique a été administré à des rates gestantes du 7e au 16e jour de gestation à des doses de 0,1, 0,3 et 0,6 g/kg afin d'observer son effet tératogène.
RésultatsAprès 90 jours d'administration d'acide nervonique, les analyses hématologiques ont montré qu'à 45 et 90 jours, le nombre de leucocytes (GB), d'érythrocytes (GR) et l'hémoglobine (HGB) avaient diminué chez les femelles du groupe ayant reçu 0,6 g/kg, et que le nombre de GR et l'HGB avaient diminué dans le groupe ayant reçu 0,3 g/kg. Chez les mâles, le nombre de GB avait diminué dans tous les groupes de dose à 45 jours, et l'HGB avait diminué dans le groupe ayant reçu 0,6 g/kg. À 90 jours, le nombre de GB avait diminué dans le groupe ayant reçu 0,6 g/kg. Les analyses biochimiques sanguines ont montré que chez les rates, les taux d'ALT et d'AST avaient diminué, et les taux de cholestérol total (CT) et de glucose (GLU) avaient augmenté dans le groupe ayant reçu 0,6 g/kg ; le taux d'AST avait diminué, et les taux de CT et de GLU avaient augmenté dans le groupe ayant reçu 0,3 g/kg ; le taux d'AST avait diminué dans le groupe ayant reçu 0,1 g/kg. Chez les rats mâles, les taux d'ALT et d'AST avaient diminué, et les taux de protéines totales (PT), d'albumine (ALB) et de glucose avaient augmenté dans le groupe ayant reçu 0,6 g/kg ; les taux d'ALT et d'AST avaient diminué dans le groupe ayant reçu 0,3 g/kg. Les résultats des tests de tératogénicité ont montré que l'acide nervonique à 0,6 g/kg réduisait dans une certaine mesure le taux de survie des embryons chez les rates gestantes.
ConclusionLorsque l'acide nervonique est utilisé comme aliment santé, sa durée de conservation doit être limitée et la dose journalière ne doit pas dépasser 0,6 g/kg.
L'acide nervonique est une substance naturelle présente en grande quantité dans les tissus nerveux et cérébraux. Il contribue au bon fonctionnement du cerveau, favorise son développement et participe à la réparation des terminaisons nerveuses endommagées. Cette étude a principalement consisté en un test de toxicité à court terme par administration orale répétée d'acide nervonique. L'objectif était d'observer les réactions toxiques, les organes ou tissus cibles et la réversibilité des lésions toxiques induites par l'administration continue du médicament, afin de fournir des éléments de référence pour la conception optimale de protocoles d'essais de toxicité animale sur des périodes plus longues et pour les recherches cliniques.
1 Matériaux expérimentaux
1.1 Médicaments et réactifs
Acide nervonique (CAS n° 506-37-6 ; Xi'an Sost Biotech Co., Ltd., lot n° : qckm20240606) se présente sous forme de poudre cristalline blanche. Avant utilisation, elle est mise en suspension à la concentration appropriée dans une solution de carboxyméthylcellulose sodique (CMC-Na) à 0,5 % (Anhui Shanhe Pharmaceutical Excipients Co., Ltd., lot n° : 241006) utilisée comme solvant. Kits de test : hématologie (Abbott Laboratories, États-Unis) ; bandelettes de test urinaire (Siemens Medical Diagnostics (Shanghai) Co., Ltd.) ; électrolytes sériques (Shenzhen Yuehua Technology Development Co., Ltd.) ; biochimie sanguine (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.) ; coagulation (Instrumentation Laboratory, Allemagne).
1.2 Instruments expérimentaux
Analyseur d'hématologie Cell-Dyn3700 (Abbott Laboratories, États-Unis) ; analyseur d'urine (Bayer AG, Allemagne) ; analyseur biochimique automatique BS-200 (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.) ; analyseur d'électrolytes automatique MI-921D (Shenzhen Yuehua Technology Development Co., Ltd.) ; coagulomètre MC-4000 (Instrumentation Laboratory, Allemagne).
1.3 Animaux d'expérience
Quatre-vingt-dix rats SD sains, de qualité SPF (moitié mâles, moitié femelles), âgés de 6 à 8 semaines, ont été fournis par Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. (N° d'autorisation de production : SCXK (Jing) 2024-0001 ; N° de certificat : 11400700076799). L'expérimentation animale a été réalisée dans une animalerie de qualité SPF, à une température de 20 à 26 °C, avec une variation de température quotidienne ≤ 4 °C, une humidité relative de 40 à 70 % et un taux de renouvellement d'air supérieur à 15 fois par heure. L'environnement d'élevage était contrôlé et géré par le système de contrôle automatique SIMATIC S7-300, conforme à la norme nationale GB14925-2010 « Environnement et installations pour animaux de laboratoire ».
2 Méthodes expérimentales
2.1 Test d'alimentation de 90 jours
L'essai a été réalisé conformément à la norme GB15193.13-2003 « Essais d'alimentation de 30 et 90 jours ». Après une période d'acclimatation de 5 jours, 80 animaux présentant un écart de poids corporel n'excédant pas ±20 % du poids moyen ont été sélectionnés et répartis aléatoirement en 4 groupes : un groupe témoin et trois groupes expérimentaux (acide nervonique à des doses faibles, moyennes et élevées, respectivement de 0,1, 0,3 et 0,6 g/kg). La substance testée a été incorporée à l'aliment de base à des concentrations respectives de 2,0 %, 6,0 % et 12,0 % (la dose de la substance testée a été convertie en quantité d'aliment en fonction de la consommation pour 100 g de poids corporel, et la consommation alimentaire journalière des rats lors de l'essai de 90 jours a été convertie en 8 % du poids corporel). Le groupe témoin a reçu l'aliment de base. Chaque groupe était composé de 20 animaux, moitié mâles, moitié femelles. Une observation continue a été réalisée pendant 90 jours.
2.2 Test de tératogénicité
(1) Groupement et dose de la substance d'essai
Les animaux ont été répartis en 5 groupes de 12 animaux chacun : groupe témoin solvant, groupe témoin positif (vitamine A1 3000 μg/kg•pc, volume de gavage 5 ml/kg) et groupes de substances testées (acide nervonique à des doses faibles, moyennes et élevées de 0,1, 0,3 et 0,6 g/kg•pc respectivement ; 0,6 g/kg•pc était la concentration maximale utilisée et le volume de gavage était de 10 ml/kg).
(2) Méthode de fonctionnement
Le test a été réalisé conformément aux exigences de la norme GB15193.14-2003 « Test de tératogénicité ». Après une période d'acclimatation de trois jours, les rats mâles et femelles achetés ont été sélectionnés et placés en cage selon un ratio mâles/femelles de 1:1. Chaque matin, un frottis vaginal a été effectué chez les rates. Si un grand nombre de spermatozoïdes étaient observés au microscope, la rate était considérée comme fécondée, séparée du mâle et considérée comme gestante ; ce jour était alors enregistré comme le jour 0 de la gestation. En l'absence de fécondation dans les cinq jours suivant la mise en cage, le mâle était remplacé. Les rates gestantes ont été réparties aléatoirement en groupes, pesées et numérotées, chaque groupe comprenant au moins douze animaux. Du 7e au 16e jour de gestation, chaque groupe de rates gestantes a reçu la substance testée une fois par jour, en fonction de son poids. Les rates ont été sacrifiées au 20e jour de gestation. L'état de gestation de la mère et le développement fœtal ont été examinés par laparotomie. L'utérus a été rapidement prélevé, son poids avec les fœtus (poids de la portée) a été mesuré, puis les fœtus ont été extraits. Le nombre de fœtus résorbés, de fœtus morts précocement, de fœtus morts tardivement et de fœtus vivants a été enregistré et examiné. Le poids et la longueur de chaque fœtus ont été mesurés individuellement, et l'aspect des fœtus a été vérifié afin de déceler d'éventuelles anomalies. La moitié des fœtus vivants de chaque portée a été marquée pour un examen osseux ; l'autre moitié a été fixée dans du fixateur de Bouin pour un examen viscéral.
2.3 Analyse statistique
Le logiciel SPSS 17.0 a été utilisé pour l'analyse statistique. Les données de comptage ont été analysées par le test t et les données de mesure par le test du χ². Une valeur p
3 Résultats expérimentaux
3.1 Test d'alimentation de 90 jours
3.1.1 Effet sur le poids corporel et le taux d'utilisation des aliments
Au cours du test, le pelage des rats des groupes à dose élevée, moyenne et faible était blanc et brillant, sans différence significative avec celui du groupe témoin. Aucun comportement ni manifestation anormale n'a été observé. Après 90 jours d'alimentation continue, aucune différence significative n'a été constatée dans la consommation alimentaire des rats des trois groupes par rapport au groupe témoin (voir tableau 1). De même, aucune différence significative n'a été observée dans la prise de poids moyenne totale des rats des trois groupes par rapport au groupe témoin (voir tableau 2, p
Tableau 2 Résultats de la détermination du gain de poids hebdomadaire des rats nourris pendant 90 jours (g)
| L'heure du repas | Groupe à dose élevée | Groupe à dose moyenne | Groupe à faible dose | Groupe témoin | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Femelle | Mâle | Femelle | Mâle | Femelle | Mâle | Femelle | Mâle | |
| Semaine 1 | 17,30 ± 2,56 | 32,70 ± 3,30 | 21,90 ± 5,89 | 38,50 ± 2,30 | 18,30 ± 4,32 | 32,60 ± 5,88 | 26,70 ± 3,56 | 48,40 ± 7,32 |
| Semaine 2 | 19,00 ± 2,80 | 38,70 ± 5,04 | 15,40 ± 5,05 | 41,30 ± 4,50 | 15,30 ± 2,90 | 40,90 ± 4,92 | 17,30 ± 3,02 | 36,90 ± 7,56 |
| Semaine 3 | 10,90 ± 3,72 | 32,90 ± 6,28 | 7,60 ± 3,12 | 33,50 ± 4,50 | 9,60 ± 4,16 | 28,70 ± 8,90 | 10,60 ± 4,20 | 27,50 ± 7,40 |
| Semaine 4 | 7,50 ± 3,60 | 23,40 ± 10,92 | 8,80 ± 4,29 | 19,00 ± 9,20 | 9,40 ± 3,80 | 21,80 ± 5,44 | 3,60 ± 4,60 | 12,20 ± 6,36 |
| Semaine 5 | 7,10 ± 2,00 | 20,50 ± 5,50 | 4,69 ± 0,60 | 8,40 ± 8,20 | 4,64 ± 2,40 | 10,10 ± 6,70 | 3,20 ± 2,60 | 9,30 ± 7,57 |
| Semaine 6 | 8,30 ± 3,36 | 7,60 ± 5,60 | 8,70 ± 3,89 | 12,50 ± 6,50 | 13,30 ± 5,56 | 11,80 ± 4,76 | 13,80 ± 4,00 | 13,10 ± 5,92 |
| Semaine 7 | 5,60 ± 0,88 | 7,60 ± 0,88 | 7,00 ± 2,30 | 8,80 ± 2,64 | 9,80 ± 1,44 | 11,40 ± 3,68 | 3,00 ± 2,40 | 12,80 ± 1,76 |
| Semaine 8 | 6,40 ± 2,48 | 8,40 ± 2,72 | 5,20 ± 2,30 | 9,40 ± 4,48 | 12,20 ± 5,04 | 6,80 ± 3,04 | 3,40 ± 1,84 | 11,00 ± 9,20 |
| Semaine 9 | 5,80 ± 1,12 | 15,60 ± 4,32 | 5,40 ± 1,30 | 7,60 ± 2,48 | 4,72 ± 1,60 | 13,80 ± 3,44 | 3,00 ± 2,40 | 7,00 ± 3,20 |
| Semaine 10 | 4,00 ± 1,20 | 3,00 ± 2,80 | 6,00 ± 2,16 | 3,80 ± 5,52 | 6,96 ± 1,80 | 9,60 ± 4,56 | 3,40 ± 1,84 | 15,60 ± 7,36 |
| Semaine 11 | 7,60 ± 4,32 | 6,80 ± 2,88 | 6,80 ± 3,28 | 7,00 ± 3,60 | 9,20 ± 5,04 | 12,20 ± 6,96 | 4,00 ± 1,61 | 15,20 ± 9,52 |
| Semaine 12 | 8,40 ± 5,12 | 8,40 ± 4,88 | 5,00 ± 3,50 | 12,00 ± 2,40 | 5,80 ± 5,84 | 9,40 ± 2,88 | 5,60 ± 1,36 | 6,20 ± 1,04 |
| Prise de poids moyenne totale | 8,42 ± 0,73 | 17,20 ± 1,49 | 8,28 ± 0,66 | 16,63 ± 0,74 | 8,48 ± 0,69 | 17,50 ± 1,27 | 9,18 ± 0,61 | 18,03 ± 2,03 |
3.1.2 Effet sur l'hématologie
Aux jours 45 et 90 de l'administration, des prélèvements sanguins ont été effectués afin de déterminer les paramètres hématologiques : numération des globules blancs (GB) et leur classification, numération des globules rouges (GR), taux d'hémoglobine (Hb), numération plaquettaire (PLT) et taux de réticulocytes. Les résultats ont montré qu'après 45 jours d'administration de poudre d'acide nervonique, les GB, les GR et le taux d'Hb étaient significativement diminués chez les femelles du groupe à forte dose, tandis que les GR et le taux d'Hb étaient significativement diminués dans le groupe à dose moyenne. Chez les rats mâles, les trois groupes de dose d'acide nervonique ont entraîné une diminution des GB, et le taux d'Hb était significativement diminué dans le groupe à forte dose. Aucune différence significative n'a été observée pour les autres paramètres par rapport au groupe témoin (voir tableaux 3 et 4). Après 90 jours d'administration d'acide nervonique, les GB, les GR et le taux d'Hb étaient diminués chez les rates du groupe à forte dose, tandis que les GB et le taux d'Hb étaient significativement diminués dans le groupe à dose moyenne. Chez les rats mâles, le nombre de GB était diminué dans le groupe à forte dose. Il n’y avait pas de différences significatives dans les autres indicateurs par rapport au groupe témoin (voir tableaux 5 et 6).
3.1.3 Effet sur les indicateurs biochimiques sanguins chez le rat
Après 90 jours d'alimentation, des prélèvements sanguins ont été effectués afin de déterminer divers indicateurs biochimiques sanguins : alanine aminotransférase (ALT), aspartate aminotransférase (AST), protéines totales (PT), albumine (ALB), urée sanguine (BUN), créatinine (CRE), glucose (GLU), triglycérides (TG) et cholestérol total (CT). Les résultats ont montré que chez les femelles, les taux d'ALT et d'AST ont diminué, tandis que ceux de CT et de GLU ont augmenté dans le groupe à forte dose ; l'AST a diminué, et ceux de CT et de GLU ont augmenté dans le groupe à dose moyenne ; l'AST a diminué dans le groupe à faible dose (voir tableau 7). Chez les rats mâles, les taux d'ALT et d'AST ont diminué, tandis que ceux de PT, d'ALB et de GLU ont augmenté dans le groupe à forte dose ; l'ALT et l'AST ont diminué dans le groupe à dose moyenne (voir tableau 8). Aucune différence significative n'a été observée pour les autres indicateurs par rapport au groupe témoin.
3.1.4 Effet sur le poids des principaux organes des rats
Après 90 jours d'administration d'acide nervonique, le poids absolu et le poids relatif du foie, des reins, de la rate, du cœur, du cerveau, des glandes surrénales, du thymus et des testicules ont été mesurés. Les résultats ont montré une augmentation significative du poids relatif du foie et des reins chez les rats des deux sexes, dans chaque groupe de dose (p
Tableau 9 Résultats de la détermination des coefficients organiques chez les rats nourris pendant 90 jours (moyenne des mâles et des femelles) (%)
| Groupe | Cœur | Foie | Rate | Poumon | Rein | Utérus et ovaires | Testicule et épididyme |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Groupe témoin | 0,3340 ± 0,0746 | 3,2980 ± 0,8830 | 0,1857 ± 0,0332 | 0,6288 ± 0,1594 | 0,5668 ± 0,0818 | 0,3324 ± 0,1224 | 1,5142 ± 0,2401 |
| Groupe à faible dose | 0,3212 ± 0,0271 | 3,3183 ± 0,3385 | 0,2053 ± 0,0313 | 0,7332 ± 0,1068 | 0,6007 ± 0,0762 | 0,3567 ± 0,1783 | 1,4235 ± 0,1090 |
| Groupe à dose moyenne | 0,3478 ± 0,0665 | 3,4869 ± 0,5588 | 0,1877 ± 0,0228 | 0,6919 ± 0,1430 | 0,6413 ± 0,0603 | 0,3696 ± 0,1900 | 1,4917 ± 0,0787 |
| Groupe à dose élevée | 0,3441 ± 0,0286 | 4,0139 ± 0,3039 | 0,2280 ± 0,0259 | 0,7087 ± 0,1033 | 0,6490 ± 0,0659 | 0,3648 ± 0,1824 | 1,5454 ± 0,1535 |
3.1.5 Effet sur la pathohistologie
Après administration continue d'acide nervonique à des rats pendant 90 jours, le cœur, le foie, la rate, les reins, les glandes surrénales, le thymus, l'estomac, le cerveau, le duodénum, le côlon et les gonades (testicules et ovaires) soumis n'ont montré aucun changement pathologique évident et régulier lié à la substance testée.
3.2 Effet sur le test de tératogénicité
3.2.1 Effet sur le nombre de fœtus vivants, de fœtus résorbés, de fœtus morts tardivement et de fœtus morts chez les rates gestantes
Les trois groupes de doses de la substance testée (acide nervonique) ont inhibé le taux de survie des embryons chez les rates gestantes (voir tableau 10).
Tableau 10 Effet de l'acide nervonique sur le nombre de fœtus vivants, de fœtus résorbés, de fœtus morts tardivement et de fœtus morts chez les rates gestantes
| Groupe | Nombre total de fœtus | Fœtus vivants | Fœtus morts en fin de vie | Fœtus résorbés | fœtus morts | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Nombre | Pourcentage (%) | Nombre | Pourcentage (%) | Nombre | Pourcentage (%) | Nombre | Pourcentage (%) | ||
| Groupe de contrôle des solvants | 135 | 134 | 99,3 | 0 | 0 | 1 | 0,7 | 0 | 0 |
| Groupe témoin positif | 108 | 65 | 60,2* | 2 | 1.9 | 39 | 36.1 | 2 | 1.9 |
| Groupe à dose élevée (0,6 g/kg) | 117 | 94 | 80,3* | 2 | 1.7 | 21 | 17.9 | 0 | 0 |
| Groupe à dose moyenne (0,3 g/kg) | 156 | 146 | 93,6 | 0 | 0 | 9 | 5.8 | 1 | 0,6 |
| Groupe à faible dose (0,1 g/kg) | 113 | 110 | 97,3 | 0 | |||||
3.2.2 Effet sur le poids fœtal, la taille du corps, le taux de malformations osseuses et le taux de malformations viscérales
Il n'y avait pas de différences significatives en termes de poids fœtal, de longueur corporelle, de taux de malformations osseuses et de taux de malformations viscérales entre chaque groupe de dose d'acide nervonique et le groupe témoin solvant.
4 Conclusion
Conclusion du test : Lorsque l'acide nervonique est utilisé comme substance testée à une dose ajoutée de 0,6 g/kg, aucun effet nocif évident n'est observé après 90 jours d'administration chez les rats.
5 Discussion
L'acide nervonique, en tant que nouvelle matière première alimentaire, est utilisé dans de nombreux produits alimentaires et de santé, tant au niveau national qu'international. Conformément aux exigences de déclaration des nouvelles matières premières alimentaires nationales, Xi'an Sost Biotech Co., Ltd. a étudié l'innocuité de l'acide nervonique conformément aux normes nationales de sécurité alimentaire.
Dans cette étude, matière première d'acide nervonique L'acide nervonique a été administré à des rats pendant 90 jours. Dans le groupe ayant reçu une dose de 0,6 g/kg, aucune différence significative n'a été observée concernant le poids corporel et la consommation alimentaire totale par rapport au groupe témoin. L'analyse hématologique a révélé une légère diminution du nombre de globules rouges, du taux d'hémoglobine et du nombre de globules blancs aux jours 45 et 90. Les taux d'AST et d'ALT ont diminué, tandis que le cholestérol total et la glycémie ont augmenté dans les groupes ayant reçu des doses de 0,36 g/kg et 0,6 g/kg au jour 90. Ces variations sont dose-dépendantes, ce qui indique que l'acide nervonique a un impact sur le nombre de globules blancs, de globules rouges, le taux d'hémoglobine, le cholestérol total et la glycémie. Les tests de tératogénicité ont montré que la dose de 0,6 g/kg d'acide nervonique augmentait significativement le nombre de fœtus morts tardivement, résorbés et morts précocement chez les rates gestantes, et réduisait le taux de survie embryonnaire. Il est donc possible que l'acide nervonique ait un impact sur le début de la gestation.
En résumé, les recherches et l'analyse de la littérature scientifique pertinente indiquent que l'administration prolongée et à forte dose d'acide nervonique peut affecter les leucocytes, les globules rouges, l'hémoglobine, les lipides sanguins et la glycémie. L'acide nervonique étant largement utilisé dans les produits de santé et au quotidien, il convient de noter que la dose journalière recommandée dans ces produits ne doit pas dépasser 0,6 g et que la durée d'utilisation doit être limitée.
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